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- 细粒棘球蚴（中国大陆株）线粒体苹果酸脱氢酶重组蛋白的表达、纯化及免疫特性分析
- 作者： 张静 王洁 王淑静 张焱 高岭 赵巍 来源： 中国病原生物学杂志 年份： 2006 文献类型 ： 期刊 关键词： 免疫鉴定 蛋白纯化 细粒棘球蚴 线粒体苹果酸脱氢酶(mMDH)
- 描述： 目的 对细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶(Eg mMDH )重组质粒进行原核表达、纯化,并初步鉴定重组蛋白的免疫学特性. 方法 对已构建的基因工程菌株mMDH/pGEM-T/JM109进行酶切,获取目的基因.将目的基因重组到pET28a表达载体上,筛选阳性表达菌株并进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定重组mMDH蛋白质为包涵体后,超声破碎细胞,尿素溶解包涵体,镍柱亲和层析法纯化,获取重组蛋白.以纯化的mMDH作抗原免疫小鼠,用Western blot和ELISA方法检测重组蛋白的免疫原性及免疫鼠血清抗体水平. 结果 成功构建原核重组表达载体mMDH/pET28a/BL21,并纯化出浓度较高的重组蛋白.ELISA结果显示,重组抗原免疫小鼠诱导产生了一定水平的血清抗体;Western blot显示,原头蚴、囊液等天然抗原能被重组抗原免疫的小鼠血清识别. 结论 纯化后的重组蛋白mMDH具有较强的免疫原性,有望作为包虫病候选疫苗,值得进一步深入研究.