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- 结核分枝杆菌特异性抗原 ESAT6的串联表达及其免疫原性研究
- 作者： 刘晓磊 张慧丽 李峰 王战争 韩静 杨艳坤 高岭 来源： 中华临床医师杂志(电子版) 年份： 2015 文献类型 ： 期刊 关键词： 原核表达 ESAT6 免疫原性
- 描述： 目的表达并纯化ESAT6c2融合蛋白,并对融合蛋白免疫原性进行鉴定,以用作结核菌特异性IFN-γElispot试剂盒的特异性抗原。方法全基因合成ESAT6目的基因,利用Bam HⅠ和BglⅡ同尾酶串联目的基因,构建ESAT6c2-p ET25b重组质粒,转化E.coli,诱导表达。Ni柱亲和纯化融合蛋白,测定浓度后应用到T.SPOT-TB试剂盒(Oxford)检测临床样本进行免疫原性研究。结果成功构建了ESAT6串联表达重组质粒,制备出高纯度的ESAT6c2融合蛋白。临床样本检测结果表明ESAT6c2融合蛋白作为刺激源,与临床诊断相比特异性为100%(20/20),灵敏度为84.61%(33/39);与T.SPOT-TB试剂盒TA检测孔有较强一致性(Kappa=0.932)。稳定性研究也表明,ESAT6c2融合蛋白经加速破坏试验后,与临床诊断相比特异性为100%(20/20),灵敏度为84.38%(27/32);依然与TA检测孔有较强一致性(Kappa=0.923)。结论 获得的高纯度ESAT6c2融合蛋白,可以应用于结核菌特异性IFN-γElispot试剂盒。