抑制视网膜母细胞瘤结合蛋白2基因表达促进人脂肪基质细胞成骨向分化的研究

【类型】期刊

【作者】葛雯姝 周永胜 冯海兰 马桂娥 刘云松 许永伟 

【刊名】中华口腔医学杂志

【关键词】 慢病毒 RNA 小分子干扰 人脂肪基质细胞 视网膜母细胞瘤蛋白质

【资助项】国家自然科学基金

【摘要】探讨视网膜母细胞瘤结合蛋白2(retinoblastoma binding protein 2,RBP-2)在人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cell,hASC)成骨向分化中的作用.方法 设计靶向RBP-2小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列4对,将相应寡核苷酸构建到慢病毒载体pLL 3.7中,于293T细胞进行病毒包装用于RBP-2基因敲低.采用RBP-2敲低效果好的两个siRNA序列进行病毒包装,并以非沉默siRNA的pLL 3.7质粒包装的慢病毒为对照组,感染hASC,培养第14天定量检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性并行ALP染色及茜素红矿化结节染色,检测hASC成骨向分化的差异.结果 成功构建RBP-2基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应慢病毒.慢病毒感染hASC后,RBP-2 mRNA及蛋白表达均被明显抑制.RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组的敲低效果较好,以此两组感染hASC.成骨诱导培养第14天RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组ALP活性[(299.2±22.7)、(224.3±17.7)U/g]高于对照组[(129.9±12.9)U/g,P＜0.05],RBP-2 siRNA-1组和RBP-2 siRNA-4组茜素红及ALP染色强于对照组.结论 成功构建的RBP-2 RNA干扰慢病毒能显著抑制RBP-2表达,并促进hASC向成骨细胞分化,即RBP-2可以抑制hASC的成骨向分化.

【年份】2011

【期号】第3期

【作者单位】葛雯姝,周永胜,冯海兰,刘云松,许永伟,GE Wen-shu,ZHOU Yong-sheng,FENG Hai-lan,LIU Yun-song,XU Yong-wei(北京大学口腔医学院·口腔医院修复科,100081)；马桂娥,MA Gui-e(中国医学科学院整形外科医院体型雕塑吸脂中心)

【全文挂接】获取全文